Subaru Hasegawa mempunyai ambisi untuk menjadi salah satu superstar bola basket terbaik sepanjang masa. Namun, hal ini terhenti ketika tim bola basket sekolahnya menghentikan aktivitasnya selama satu tahun. Terkejut dengan berita tersebut, dia memutuskan untuk tidak melibatkan dirinya dalam bola basket lagi. Suatu hari, bibinya Mihoshi Takamura mengundangnya untuk melatih tim bola basket putri Akademi Keishin tentang cara bermain olahraga tersebut, dan dia dengan enggan menyetujuinya. Dia bertemu siswa kelas enam Tomoka Minato, Maho Misawa, Airi Kashii, Hinata Hakamada dan Saki Nagatsuki, dan mulai melatih mereka dalam olahraga ini dengan satu tujuan: mengalahkan semua lawan kuat di sepanjang jalan. Ro-Kyu-Bu! mengikuti upaya lima gadis sekolah dasar dan pelatih mereka saat mereka meningkatkan gaya bermain basket mereka yang lucu.